畜牧業(yè)是一個承工啟農(nóng)的 中軸產(chǎn)業(yè), 既可促進種植業(yè), 又能帶動加工業(yè)和服務(wù)業(yè), 形成農(nóng)業(yè)內(nèi)部產(chǎn)業(yè)和三次產(chǎn)業(yè)間的良性循環(huán), 促進農(nóng)產(chǎn)品的轉(zhuǎn)化增值。近年來, 我國畜牧業(yè)呈現(xiàn)出加快發(fā)展勢頭, 截至2009 年, 畜牧業(yè)產(chǎn)值已占農(nóng)業(yè)總產(chǎn)值的34%, 畜牧業(yè)發(fā)展快的地區(qū), 畜牧業(yè)收入已占到農(nóng)民收入的40% 以上, 畜牧業(yè)已由傳統(tǒng)的家庭副業(yè)發(fā)展成為農(nóng)村經(jīng)濟的主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)和農(nóng)民增收的重要渠道, 但動物傳染性疾病診斷、食物添加劑、藥物殘留等方面存在的問題制約著畜牧業(yè)向更深層次發(fā)展。酶聯(lián)免疫吸附測定法( Enzyme- Linked Immunosorbent A ssay, ELISA) 是免疫學(xué)診斷中的一項新技術(shù), 由于其具有快速、敏感、簡便、易于標準化等優(yōu)點 。隨著單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展應(yīng)用及免疫試劑盒的商業(yè)化, ELISA 不但應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫學(xué)診斷, 也應(yīng)用于分子抗原和抗體的測定, 其應(yīng)用范圍日益擴大, 目前ELISA 已廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)、分析化學(xué)、食品分析等領(lǐng)域, 但在畜牧業(yè)方面的應(yīng)用, 國內(nèi)目前尚未廣泛使用。本文通過對ELISA 在畜牧行業(yè)中應(yīng)用的介紹, 旨在促進該技術(shù)在畜牧行業(yè)的應(yīng)用和推廣。
1 ELISA 的原理、特點及分類ELISA 的理論基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。固相載體表面的抗原或抗體包被后可保持其免疫學(xué)活性, 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性, 又具有酶的活性。在測定時,受檢標本( 測定其中的抗體或抗原) 與固相載體表面的抗原或抗體發(fā)生免疫反應(yīng), 洗滌后, 可使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開, 再加入酶標記的抗原或抗體, 也通過特異反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上, 這時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定比例, 加入酶反應(yīng)底物后, 底物被酶催化成為有色產(chǎn)物, 產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān), 故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。ELISA 技術(shù)與經(jīng)典的化學(xué)、生物學(xué)的檢測方法比較, 具有以下特點: 敏感性強, 檢測限可達ng 甚至pg 水平, 可作定量測定; 外界干擾小、抗原抗體的免疫反應(yīng)特異性高, 非特異性反應(yīng)少, 結(jié)構(gòu)類似物、有色物質(zhì)等對檢測的干擾很小; 操作簡便快捷、檢測速度快, 由于特異性強, 簡化了樣品的預(yù)處理和提取純化過程, 一次可檢測大批標本; 安全性高, 污染少, 因為靈敏度高, 標準品的濃度可以很低, 有機溶劑用量較少, 減少對檢測人員和環(huán)境的潛在危害。是當前發(fā)展最快、最容易、試劑盒應(yīng)用最廣的一項新技術(shù),目前已被廣泛用于各種疾病的實驗室診斷。在實際應(yīng)用過程中, ELISA 經(jīng)不斷改進, 根據(jù)試劑的來源、標本的情況及檢測的具體條件, 設(shè)計出各種不同類型的分析方法, 目前主要有: 雙抗體夾心法測抗原、雙抗原夾心法測抗體、間接法測抗體、競爭法測抗體、競爭法測抗原、捕獲包被法測抗體等多種方法。