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飼料中β-受體激動劑的控制與檢測方法


3 控制與檢測
3.1 控制
  一連串因食用含瘦肉精的食物而中毒的事件發(fā)生后,鹽酸克倫特羅成為世界上普遍禁用的添加劑。1997年以來,我國農(nóng)業(yè)部等相關(guān)部門多次發(fā)文,如:《關(guān)于嚴厲打擊非法生產(chǎn)經(jīng)營和使用鹽酸克倫特羅等藥品違法行為的通知》(農(nóng)牧發(fā)14號),禁止在畜牧業(yè)中使用此類藥物。然而,由于經(jīng)濟利益的驅(qū)使,生產(chǎn)上仍存在著非法濫用的現(xiàn)象。
3.2 分析檢測
  目前,萊克多巴胺的檢測方法主要有色譜法、毛細管電泳法和酶免疫分析法等,酶免疫分析法中基本上都用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)。

 由于色譜法和毛細管電泳法所需的儀器設(shè)備昂貴,樣品前處理復雜,一次檢測樣品量少,檢測時間長,不易普及等缺點,因而,只作為實驗室的確證方法。ELISA克服了以上缺點,得到廣泛的應(yīng)用,成為篩選方法。
3.2.1 ELISA
  ELISA法一般用稀酸溶液提取,離心,調(diào)pH,用樣品稀釋液稀釋并檢測。檢測過程中注意提取液的pH,一般要求在6.5~7.5,在所有恒溫孵育過程中避免光線照射。目前,用ELISA檢測飼料中的β-受體激動劑主要有克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇,常用的試劑盒品牌有“北京望爾”、“美國柏爾”和“英國朗道”等,靈敏度可達ng/g水平,可以滿足篩選分析的要求。
3.2.2 高效液相色譜法(HPLC)
  HPLC是β-受體激動劑常見的測定方法,分析時不需要衍生,利用β-腎上腺素能激動劑分子可與C18或C8固定相分子相互作用的原理進行分離。通常采用緩沖溶液和乙腈配置流動相,等溶劑或梯度洗脫來進行樣品預處理。目前,我國已將HPLC法作為檢測鹽酸克倫特羅殘留的半確證性方法。其優(yōu)點是專屬性好、選擇性強和檢測精確度較高,而且假陽性率低;缺點是樣品處理時間長,檢測過程繁瑣。相關(guān)標準:《飼料中鹽酸克倫特羅的測定》(NY438-2001)。此法適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預混合飼料中鹽酸克倫特羅含量的測定,HPLC檢測限為0.05mg/kg;《飼料中萊克多巴胺的測定高效液相色譜法》(GB/T20189-2006)。此法適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預混合飼料中萊克多巴胺含量的測定,檢測限為0.5μg/g。
3.2.3 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)
  此法優(yōu)點是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機結(jié)合起來,并且能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性和定量分析,而且具更高的檢測極限。但是由于GC-MS要求樣品有較低的沸點且相對熱穩(wěn)定性,而β-受體激動劑的極性大,沸點高,不宜直接用于分析,故測定前要對分子上羥基和氨基等極性基團衍生化,主要有硅烷化和環(huán)化衍生2種。GC-MS法與HPLC法相比,檢測靈敏度更高,假陽性率更低。因此,我國將GC-MS法定為檢測鹽酸克倫特羅的確證性方法。相關(guān)標準:《飼料中鹽酸克倫特羅的測定》(NY438-2001)。此法適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預混合飼料中鹽酸克倫特羅含量的測定,GC-MS法檢測限為0.01mg/kg;《飼料中沙丁胺醇的測定-氣相色譜法/質(zhì)譜法》(NY/T1030-2006),此法適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預混合飼料中沙丁胺醇含量的測定,最低檢測質(zhì)量濃度為0.02mg/kg;《飼料中西馬特羅的測定-氣相色譜法/質(zhì)譜法》(NY/T1033-2006),此法適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預混合飼料中西馬特羅含量的測定,最低檢測質(zhì)量濃度為0.05mg/kg;《飼料中8種β-受體激動劑的檢測氣相色譜-質(zhì)譜法》(農(nóng)業(yè)部1063號公告-7-2008)。本法適用于配合飼料中氯丙那林、馬布特羅、特布他林、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、齊帕特羅、班布特羅和萊克多巴胺的測定。其定量限和檢出限:萊克多巴胺為0.5和0.1mg/kg,其他7類藥物分別為0.05和0.01mg/kg。
3.2.4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS-MS)
  在液相色譜檢測時使用質(zhì)譜檢測器可以大大降低檢測限,尤其是二級質(zhì)譜可以作為特異性檢測器,也可以彌補色譜上分離的不足。但由于此法的靈敏度高,要求上機樣液質(zhì)量濃度相對較低,為避免儀器過載,對于含量高的樣品要進行多次稀釋,這樣會造成結(jié)果偏差較大。相關(guān)標準:《飼料中13種β-受體激動劑的檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》(農(nóng)業(yè)部1063號公告-6-2008)。本法適用于飼料中氯丙那林、馬布特羅、特布他林、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、齊帕特羅、班布特羅、萊克多巴胺、溴布特羅、克倫普羅和妥布特羅的測定。其檢出限和定量限分別為0.01和0.05mg/kg。

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