2013-09-2015-06,華中農(nóng)業(yè)大學(xué),預(yù)防獸醫(yī)專(zhuān)業(yè),碩士 2013.07-2014.03 豬肺炎支原體P36蛋白單克隆抗體的制備及鑒定 將pET-28a(+)-P36成功轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3),優(yōu)化表達(dá)條件以可溶性形式高效表達(dá);使用AKTA FPLC(Amersham Biosciences UPC-900)快速純化液相色譜系統(tǒng)對(duì)蛋白進(jìn)行Ni柱親和純化;復(fù)蘇培養(yǎng)Mhp168株F109代,進(jìn)行CCU測(cè)定,制備Mhp全菌蛋白用于后續(xù)單抗篩選與驗(yàn)證;通過(guò)免疫小鼠、細(xì)胞融合、有限稀釋法克隆陽(yáng)性細(xì)胞孔、Western blot驗(yàn)證特異性得獲得雜交瘤細(xì)胞株;采用辛酸-飽和硫酸銨沉淀法對(duì)在小鼠體內(nèi)誘生的腹水進(jìn)行純化,獲得4株高效價(jià)高純度的單抗。 2014.03-2014.05 建立豬肺炎支原體雙抗體夾心ELISA與熒光定量PCR檢測(cè)方法 HRP酶標(biāo)單抗,使用Mhp全菌蛋白建立優(yōu)化雙抗體夾心ELISA,但無(wú)法檢測(cè)到臨床鼻拭子樣品中的Mhp;設(shè)計(jì)Mhp P36基因的熒光定量引物和探針,成功建立FQ-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,但敏感性不高,課題中斷。 2014.06-2015.03 按照新獸藥申請(qǐng)材料開(kāi)展豬肺炎支原體間接ELISA檢測(cè)試劑盒的研發(fā) 成功表達(dá)純化多批Mhp的三聯(lián)融合蛋白,用作包被抗原建立間接ELISA,增加檢測(cè)方法的敏感性;摸索ELISA方法的最佳反應(yīng)條件,判定陰陽(yáng)性界值,評(píng)價(jià)方法的特異性、敏感性、重復(fù)性和穩(wěn)定性;將所建立的ELISA方法與IDEXX試劑盒共同檢測(cè)大量臨床血清樣品,結(jié)果符合率高。 2008-09-2013-06,華中農(nóng)業(yè)大學(xué),動(dòng)物醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè),本科 2012.11-2013.04 豬圓環(huán)病毒2型 ORF2基因在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)及其優(yōu)化 PCR擴(kuò)增ORF2基因,成功構(gòu)建pVL1392-ORF2表達(dá)質(zhì)粒;熟悉掌握Sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞的傳代培養(yǎng);將表達(dá)質(zhì)粒與線性化桿狀病毒DNA共轉(zhuǎn)染Sf9,經(jīng)多次擴(kuò)增獲得高滴度的重組病毒;Western blot檢測(cè)不同感染復(fù)數(shù)下細(xì)胞培養(yǎng)液上清和細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá)量。
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